膠原酶Ⅰ

膠原酶Ⅰ

用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細胞的分離
膠原蛋白酶 來源于溶組織梭菌
膠原酶Ⅰ可以用 TESCA buffer (50 mM TES，0.36 mM 氯化鈣，pH 7.4，37°C)配制成 1-2 mg/ml。 也可以用含鈣鎂的 PBS、含鈣鎂的 hanks 或不含血清的培養基配制。配完后分裝，避免反復凍融。
1 個膠原消化單位(CDU)：在 pH 7.4，37℃以及鈣離子存在的條件下，以每5小時從膠原中 釋放的多肽相當于茚三酮顯色1微摩爾亮氨酸量為一個活性單位。
1FALGPA 單位：在 pH 7.5、25℃以及鈣離子存在的條件下，一個 FALGPA 水解單位每分鐘 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
膠原酶Ⅰ為粗品，用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細胞的分離。外觀為黑棕色粉末。分子量68,000 到125,000，最適PH為6.3-8.8。膠原酶能夠特異性結合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X) 和甘氨酸之間的肽鍵。該粗品是溶組織梭菌分泌的混合酶。主要為膠原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活潑的酶，組織的分離必須依靠膠原酶和中性蛋白酶兩者共 同作用。
激活劑：Ca2+，最適合濃度為5 mM。
抑制劑：EGTA、還原性谷胱甘肽、β-巰基乙醇、巰基乙酸鈉、8-羥基喹啉、2,2'-聯吡啶等。
底物：不同類型的膠原是其天然底物，而一些合成的多肽也可以作為其底物，比如： N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 類膠原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎動物 膠原酶的底物。