1

  如何進行色譜柱的維護?

  ①建議檢測前樣品和流動相進行過濾。

  ②建議每天做完樣品后及時進行清洗。

  ③常規檢測：測試完后直接把色譜柱反向連接采用90%有機相沖洗45min，最后保存在純甲醇或純乙腈中。

  ④使用緩沖鹽條件：

  a.等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。

  b.梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min。

  注意：

  1.過渡流動相是指有機相和水相比例與分析流動相相同比例，只是不含有緩沖鹽。

  2.緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機相反向沖洗60min，最后保存在純有機溶劑中。

  3.使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜。

  2

  氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子，

  如使用一段時間后，柱效較低，峰形改變

  如何恢復?

  用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。

  3

  液相色譜中峰出現拖尾

  或出現雙峰的原因是什么?

  ①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

  ②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。

  ③可能柱超載，減少進樣量。

  4

  HPLC靈敏度不夠的主要原因

  及解決辦法是什么?

  ①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量。

  ②樣品未從柱子中流出，可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子。

  ③樣品與檢測器不匹配，根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器。

  ④檢測器衰減太多，調整衰減即可。

  ⑤檢測器時間常數太大，解決辦法為降低時間參數。

  ⑥檢測器池窗污染，解決辦法為清洗池窗。

  ⑦檢測池中有氣泡，解決辦法為排氣。

  ⑧記錄儀測壓范圍不當，調整電壓范圍即可。

  ⑨流動相流量不合適，調整流速即可。

  ⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線，解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

  5

  做HPLC分析時，柱壓不穩定

  原因何在?如何解決?

  ①泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理。

  ②比例閥失效，更換比例閥即可。

  ③泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

  ④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法。

  ⑤系統檢漏，找出漏點，密封即可。

  ⑥梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。