甘肅色譜試劑廠家?甘肅色譜試劑廠家有哪些?色譜試劑廠家找斯坦利生物科技，色譜試劑銷售電話：132-0160-1310 關于柱色譜技術介紹如下：

1. 柱色譜原理

柱色譜分離法是在色譜柱中完成的，其中主要涉及吸附劑、洗脫劑及待分混合物。

待分混合物從柱頂加入裝有吸附劑的色譜柱中，然后連續不斷的向下加入洗脫溶劑，待分混合物中的各化合物由于分子結構不同，他們在吸附劑和洗脫劑中的分配系數大小不同，隨著洗脫劑的不斷下移，吸附能力小的化合物下移速度快，而吸附能力大的化合物下移速度慢，如果柱子足夠長的話，混合物中的各組分在柱內即可被分離開來，通過分別接收不同的洗脫液，然后蒸餾除去洗脫液，即可獲得各種不同的純組分。

⑴吸附劑

供柱層析法用的固體吸附劑按與極性化合物發生結合作用的能力遞增次序有：紙、纖維素、淀粉、糖類、硅酸鎂、硫酸鈣、硅膠、氧化鎂、氧化鋁和活性炭等，硅膠和氧化鋁是常用的兩種。

硅膠(200~400目)對大多數化合物來說相對比較溫和，可廣泛用于烴、醇、酮、酯、羧酸、偶氮化合物和胺等的分離。

氧化鋁分為：酸性Al2O3(pH=4)，適于分離羧酸、氨基酸等酸性物質;堿性Al2O3(pH=10)，適用于分離胺類物質;中性Al2O3，適于分離中性物質。

硅膠和氧化鋁的強度或分離能力在很大程度上取決于其中所存在的水。水能非常緊密地與這兩種吸附劑結合，占去了顆粒上的一些部位，這些部位本來是可以供吸附有機物的，若向吸附劑里加進水，可認為吸附劑失活了，無水硅膠或氧化鋁是高活化的。但通常要避免使用高活化的吸附劑，因其會使待分離化合物發生某些形式的破壞作用和分解作用，如發生分子重排反應等。

⑵洗脫劑與被洗脫物的關系

①常用洗脫劑對極性官能團的“溶劑能力”和極性遞增次序如下：石油醚、環己烷、四氯化碳、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、吡啶、丙酮、乙醇、甲醇、水、乙酸。

②各種化合物被洗脫的次序：烷烴、烯烴、醚、鹵烴、芳烴、酮、醛、酯、醇、胺、酰胺、(酸和強堿)。烴可用非極性溶劑洗脫，而酸和強堿必須用極性溶劑才能洗脫。

⑶洗脫規律

有時可以找到一種單一溶劑，用它可以分離一個混合物中的所有組分。

有時則可以找到一種能使分離得以實現的混合溶劑。

更經常的是：必須先用一種非極性溶劑開始洗脫，把相對非極性的化合物從柱中除去，然后逐漸增大熔劑的極性以促進極性較大的化合物從柱中流出或洗脫。

一般說，非極性化合物從柱中通過得最快，極性化合物通過的較慢。

分子量也是一個決定洗脫次序的因素，高分子量的非極性化合物也可能比低分子量的極性化合物通過得慢，甚至可能被某些極性化合物所超過。

使用硅膠和氧化鋁時，要避免使用酸性、堿性和高活性形式的溶劑。例如：丙酮可以與任何一個這樣的吸附劑通過羥醛縮合作用二聚成乙酰丙酮。當用乙酸乙酯或醇類作洗脫劑時，會使酯類的混合物發生酯交換作用。更活潑的溶劑(吡啶、甲醇和乙酸)會溶解和洗脫一部分吸附劑本身，一般情況下應避免使用洗脫液系列中極性超過乙醚或氯仿的溶劑。

洗脫時，溶劑極性的增大應逐漸進行，如果不這樣做，柱內填充料往往會出現裂縫，裂縫的出現是由于吸附劑與溶劑混合時發熱所致。

溶劑+吸附劑 = 溶劑·吸附劑+熱

突然注入較大極性的溶劑，往往能在局部生成足能使溶劑蒸發的熱量。蒸汽的產生造成了氣泡，氣泡可把柱內的填料擠開而形成裂縫，裂縫會使分離效果下降。

⑷柱的尺寸和吸附劑量

經驗規律是：吸附劑的重量是待分物料的30~40倍。柱子的高度和直徑比應大約為8:1。

某些典型樣品量適用的柱尺寸和吸附劑量如下：

應注意的是，柱的尺寸和長度以及需用的吸附劑的數量，都決定于分離的困難程度，不易分離的化合物可能需要使用比經驗規律更長的柱和更多的吸附劑。

⑸洗脫劑流速

一般說，需分離的混合物在柱上停留的時間越長，其在固液相的平衡越好，結果可能會使較為相似的化合物最終得以分離。但流速過慢，溶質在溶劑中的擴散速度可能變得大于下行速度，這種情況下，譜帶會變寬分離效果反而會下降。

柱色譜示意圖見圖2.6-3。

圖2.6-3 柱色譜示意圖

2. 柱色譜操作

⑴裝柱

下帶活塞的色譜柱，活塞處不要涂太多的活塞脂，以防溶入洗脫劑中。不帶砂芯的層析柱，要先向柱底加入少許洗凈烘干的長度適當的玻璃毛(或脫脂棉)，用長玻璃管從柱頂將其壓平，然后加入洗凈烘干的白沙1cm左右厚度，表面要平整。

從柱頂沿內壁緩緩注入洗脫液中極性最小的一種溶劑至柱高的一半左右，在燒杯或錐形瓶中先加入一定量的該溶劑，然后加入吸附劑，旋搖至稠厚但易流動的漿液狀，打開柱下活塞使柱內溶劑慢慢滴入接收瓶，將漿液從柱頂倒入柱中，吸附劑慢慢下沉進行均勻填料，用接收液清洗未倒完的吸附劑，倒入柱內，注意柱內液面應始終高于填料頂部，填料高度約為柱高的3/4，表面平整。

⑵加料

通過排液使溶劑水平面稍低于吸附劑頂部，用吸滴管將待分混合液或溶液(用極少量大極性可溶固體混合物的溶劑溶解所得的溶液)均勻的加于吸附劑頂部，排液，使待分液全部吸附在吸附劑頂部，用少許溶劑沖洗頂部，排液，至頂部溶劑中無擴散的待分物，此時可得一盡可能窄的加料層。壓沙約1cm，加溶劑至沙層以上，在洗脫之前讓樣品在柱頂停留一段時間，以建立一個真正的平衡，往往可得較好的分離效果。

⑶洗脫

通過滴液漏斗從柱頂加入洗脫溶劑，排液速度1滴/秒左右，先將組分中非極性或小極性物質洗脫下來，再給洗脫液中加入極性較大溶劑，加入量由小到大，如：1%、2%、5%、10%、20%…100%。使柱中待分物中的物質按極性由小到大的次序依次被洗脫出來。

⑷純品的獲得

分別蒸去分段收集組分中的溶劑，即可得到各種化合物的粗品，粗品經重結晶后才有可能獲得各種化合物的純品。