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在實際工作中，肉眼是難以準確地觀察出指示劑變色點顏色的微小的改變。人們目測酸堿指示劑從一種顏色變為另一種顏色的過程，只能在一定的pH變化范圍內才能發生，即只有當一種顏色相當于另一種顏色濃度的十倍時才能勉強辨認其顏色的變化。在這種顏色變化的同時，介質氫滅菌生物指示劑的pH值則由一個值變到另一個值。

當溶液的pH值大于pKHIn時， [In-]將大于[HIn]且當[In-]/[HIn]=10時，溶液將完全呈現堿色成分的顏色，而酸色被遮蓋了，這時溶液的 pH=pKHIn+1。同理，當溶液的pH值小于pKHIn時， [In-]將小于[HIn]且當[In-]/[HIn]=1/10時，溶液將完全呈現酸色成分的顏色，而堿色被遮蓋了，這時溶液的 pH=pKHIn-1。

可見溶液的顏色是在從pH=pKHIn-1到 pH=pKHIn+1的范圍內變化的，這個范圍稱為指示劑的變色范圍即變色域。在變色范圍內，當溶液的pH值改變時，堿色成分和酸色成分的比值隨之改變，指示劑的顏色也發生改變。超出這個范圍，如pH≥pKHIn+1時，看到的只是堿色；而在pH≤pKHIn-1時，則看到的只是酸色。

因此指示劑的變色范圍約2個pH單位。由于人的視覺對各種顏色的敏感程度不同，加上在變色域內指示劑呈現混合色，兩種顏色互相影響觀察，所以實際觀察結果與理論值有差別，大多數指示劑的變色范圍小于2個PH單位。