生物樣本庫(kù)建立中一個(gè)非常重要的問題是:生物樣本對(duì)于儲(chǔ)存溫度的要求。多數(shù)科學(xué)家認(rèn)為,低溫有利于長(zhǎng)期保存生物大分子的完整性。眾多研究顯示,長(zhǎng)期凍存對(duì)DNA大分子的穩(wěn)定性影響不大,甚至石蠟包埋組織塊中的DNA也可以進(jìn)行分子生物學(xué)分析。
RNA分子則易被廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)、皮膚、唾液、汗液及周圍環(huán)境中的RNA酶所降解,目前認(rèn)為,使用液氮是保存RNA活性最理想的方法,當(dāng)溫度降至液氮溫度(-196℃)時(shí),細(xì)胞組織中所有的生物化學(xué)、生物物理過程均處于幾乎停止?fàn)顟B(tài);如經(jīng)高溫加工處理的石蠟包埋,組織塊內(nèi)的RNA分子會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重降解。
理論上講,組織儲(chǔ)存溫度越低越好。理想的組織儲(chǔ)存環(huán)境是大型液氮罐,在-196℃的液氮中組織樣本可儲(chǔ)存多年,但限于空間及經(jīng)費(fèi)等原因,并非所有機(jī)構(gòu)都有這樣的設(shè)備,因此,目前國(guó)內(nèi)外大型生物樣本庫(kù)仍以-80℃的超低溫冰箱儲(chǔ)存為主,但在這樣的低溫環(huán)境下生物大分子活性保持的時(shí)間會(huì)明顯縮短,具體能保存多久仍無(wú)定論。
由于多數(shù)機(jī)構(gòu)手術(shù)取材地點(diǎn)與組織標(biāo)本庫(kù)并不在同一樓內(nèi),組織標(biāo)本的轉(zhuǎn)移、運(yùn)輸也需要一定時(shí)間,故各單位可酌情配備一些不太昂貴的組織儲(chǔ)存和周轉(zhuǎn)設(shè)備。
活檢組織在-20℃環(huán)境中至少可保存6個(gè)月,在-40℃的環(huán)境中則可保存3年;若將組織保存在高濃度甘油中,則在-10℃~0℃的條件下也可保存2年;若將組織保存在高濃度甘油中,再儲(chǔ)存于-80℃的低溫冰箱中,則可長(zhǎng)期保存,但這些組織不適用于RNA等研究。
同時(shí),生物樣本庫(kù)應(yīng)配備有效的智能監(jiān)控報(bào)警系統(tǒng),對(duì)樣本儲(chǔ)存溫度、儲(chǔ)存設(shè)備運(yùn)行狀況進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,對(duì)于斷電、設(shè)備故障、液氮量不足、樣本庫(kù)開關(guān)和閉鎖狀態(tài)等情況引進(jìn)險(xiǎn)情進(jìn)行實(shí)時(shí)報(bào)警。
此外,生物樣本庫(kù)建立中提倡采用不間斷電源設(shè)備,以確保樣本庫(kù)內(nèi)樣本在短時(shí)斷電情況下不會(huì)受到影響。
腫瘤組織樣本一般在離體后應(yīng)盡快收集,并保存于-80℃以下的超低溫冰箱或液氮罐內(nèi)。
血液樣本與其它臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)一起采集,采集后先置于4℃冰箱內(nèi)保存,盡量在3~5h內(nèi)離心,分離血清、血漿,最長(zhǎng)不得超過12h,分離獲得的血清、血漿則需儲(chǔ)存于-40℃的環(huán)境中,血清或血漿分離時(shí)一般于2500r/min離心15min;血液的離心沉淀物或提取后的DNA樣本可長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-145℃以下。